乙肝疫苗第二针和第一针间隔的时间是28天以上。乙肝疫苗规范的注射方法是三针注射方法，分别在0、1、6个月注射。对于成人注射20μg的重组酵母乙肝疫苗，对于儿童注射10μg的重组酵母乙肝疫苗。
第一针注射完以后要间隔28天以上注射第二针乙肝疫苗，注射完第二针乙肝疫苗以后，第三针乙肝疫苗和第一针的乙肝疫苗要间隔6个月。通过这样的注射就可以获得非常好的免疫力。一般会有80%-90%注射过疫苗的人产生有效的乙肝病毒的表面抗体。
一般在注射完第三针乙肝疫苗以后1-2个月就会产生有效水平的表面抗体，建议注射完乙肝疫苗第三针以后1-2个月，化验乙肝病毒表面抗体的水平，确定是否达到了有效的保护水平。